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七步成:恒遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)基因合成過程方法

點(diǎn)擊次數(shù):12970   發(fā)布時(shí)間:2014/2/21 10:36:16

     在前面的文章中我們還說到春雨的到來(lái),這節(jié)氣雨水后,上海市的天氣反而轉(zhuǎn)晴了。今天又是一個(gè)周五,本周的*后一個(gè)工作日,這一天一天過的真快。看到題目您就知道,今天的文章還是實(shí)驗(yàn),那么下面就來(lái)看吧,只需七步成:恒遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)基因合成過程方法。

    1、將兩種寡核苷酸各1 μg加入微量離心管中,加水至17 μl,再加2 μl 的10×測(cè)序酶緩沖液。70℃加熱5 min,然后在合適的退火溫度下保溫5  min,取2 μl 留待以后的分析。
    2、加2 μl 4種dNTP混合液和10 U測(cè)序酶,30℃溫育30 min。
    3、70℃ 10 min 滅活DNA聚合酶,取2 μl 留待以后的分析。
    4、加10×限制性內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液,加水和20~100 U 的適合于克隆的限制性內(nèi)切酶至100 μl。適當(dāng)?shù)臏囟认孪? h 以上。
    5、酚抽提,加100 μl 4 mol/l 乙酸銨和400 μl 的無(wú)水乙醇,-70℃沉淀15 min,離心5 min,沉淀重懸于100 μl TE緩沖液,用乙醇再沉淀一次,用95%乙醇洗滌沉淀,干燥,20 μl TE緩沖液溶解,取2 μl 用于以后的分析。
    6.、用篩分型瓊脂糖凝膠電泳分析確證原材料、延伸產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物,估計(jì)延伸的寡核苷酸的量,再用適當(dāng)?shù)妮d體亞克隆。
    7、對(duì)幾個(gè)合適的亞克隆測(cè)序。
    以上為本次文章的中心實(shí)驗(yàn)步驟啦,雖然雨水停了,但是現(xiàn)在購(gòu)買我公司產(chǎn)品的話還是會(huì)送雨傘哦!剛剛開學(xué),在活動(dòng)期間早點(diǎn)為實(shí)驗(yàn)而準(zhǔn)備吧。上海恒遠(yuǎn)真的非常感謝您的支持!

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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